Contoh Review Jurnal:

The evaluation of depigmenting efficacy in the skin for the

development of new whitening agents in Korea

Review Artikel

Evaluasi keberhasilan depigmenting dalam kulit untuk pengembangan agen whitening baru di Korea

K. H. Son * dan M. Y. Heo †
* Kosmetik Divisi Evaluasi, Korea Food and Drug Administration, Osong Kesehatan Administrasi Complex, 187 Osongsaengmyeong
2 (i)-ro, Osong-eup, Cheongwon-gun Chungcheongbuk-do, 363-700, Korea dan † College of Pharmacy, Kangwon National University, Chunchon
200-701, Korea

Diterima 21 Mei 2012, Disetujui 30 September 2012
Kata kunci: kosmetik, efek depigmenting, melanin, melanosit, tyrosinase

Ringkasan
Dalam ulasan ini, metode evaluasi untuk pemutaran depigmenting substrat yang diselidiki. Untuk tujuan ini, evaluasi metode tirosinase, enzim kunci biosintesis melanin, adalah yang paling sering digunakan, tetapi metode evaluasi berdasarkan peraturan transfer faktor sinyal seluler atau penghambatan melanosom mentransfer juga telah dikembangkan. Evaluasi depigmenting efek menggunakan melanosit yang kompleks. Ini memiliki keuntungan menjadi mampu menganalisis efek keseluruhan pada melanin biosintesis pada tingkat seluler. Sebelum uji klinis final depigmenting agen, dalam pengujian in vitro harus dilakukan untuk mengkonfirmasi efikasi dan keamanan depigmenting. Studi klinis untuk depigmenting agen dapat digunakan untuk menyelidiki pencegahan biosintesis melanin dan untuk menentukan apakah melanin menghilang dari kulit. Oleh karena itu, protokol yang paling sesuai harus digunakan, tergantung pada mekanisme aksi agen depigmenting.

Pengantar
Dengan perbaikan dari standar hidup di dunia global, lebih banyak orang mulai untuk mengejar kesejahteraan dan keindahan dalam bidang kesehatan , pangsa pasar produk yang membantu orang menyadari kesejahteraan dan kecantikan telah berkembang. Bahkan di pasar kosmetik , banyak produk fungsional seperti yang dikembangkan untuk melembabkan kulit, memutihkan kulit, perawatan kerut, anti - penuaan, perawatan jerawat, mengurangi selulit dan meningkatkan atopik kulit telah diluncurkan. Fenomena tersebut telah sering mengakibatkan menyesatkan, iklan membingungkan untuk produk medis untuk melindungi konsumen dari kegiatan promosi seperti menyesatkan, Pemerintah Republik Korea telah mengesahkan Kosmetik
Act dan mendefinisikan lingkup kosmetik fungsional sebagai berikut: kosmetik
produk untuk kulit efek pemutih , produk kosmetik untuk perawatan kerut dan produk kosmetik untuk perlindungan kulit dari sinar UV sinar. Sebagai evaluasi kosmetik fungsional diperkenalkan sesuai ke Korea Kosmetik Act ( 2000) , banyak kegiatan penelitian untuk menyaring zat fungsional baru telah diaktifkan di Industri kosmetik Korea.

Secara khusus , kategori whitening produk membuat naik 22,4 % dari pasar kosmetik fungsional lokal pada tahun 2011 , yang menunjukkan bahwa itu adalah salah satu kosmetik yang kategori paling penting di Republik Korea [ 1 ]. fenomena ini akibat dari gagasan tradisional Korea bahwa kulit putih faktor yang paling penting dalam keindahan. Senyawa depigmenting ideal harus memiliki khasiat yang ampuh , cepat dan efek pemutih selektif pada melanosit hiper - aktif, dampak jangka pendek atau efek samping jangka panjang, dan menyebabkan permanen penghapusan pigmen yang tidak diinginkan , yang bertindak atas satu atau lebih dari langkah-langkah proses pigmentasi. Dalam perjalanan skrining fungsional seperti zat, berbagai in vitro dan atau in vivo untuk menentukan efikasi dan keamanan harus dilakukan. Untuk mencari agen depigmenting baru, penting untuk memahami proses dan mekanisme pigmentasi. Epidermal dan dermal pigmentations, seperti melasma, flek-flek dan solar lentigo, adalah terkait dengan peningkatan jumlah melanosit dan aktivitas enzim yang terlibat dalam produksi melanin [ 2 , 3 ]. Melanosit, yang sel-sel yang memproduksi melanin, bergerak dari puncak saraf embrio pada kulit, di mana mereka dibedakan untuk membentuk melanosomes. Melanin disintesis di melanosomes bergerak ke ujung dendritik melanosit. Para melanosomes kemudian ditransfer ke keratinosit dan menghilang dengan pengelupasan keratin.

Sebagai hasil dari peran penting yang dimainkan oleh tirosinase dalam biosintesis melanin , kebanyakan agen depigmenting bertindak khusus untuk mengurangi fungsi enzim ini melalui beberapa mekanisme : ( i ) interferensi dengan transkripsi dan / atau glikosilasi , ( ii ) penghambatan oleh modalitas yang berbeda , ( iii ) pengurangan oleh - produk dan ( iv ) pasca-transkripsi kontrol [ 4, 5 ].Meskipun agen depigmenting mungkin sangat efektif , harus bebas dari masalah keamanan jika harus dibuat tersedia secara komersial. Agen depigmenting digunakan dalam pembuatan fungsional kosmetik harus memiliki karakteristik keamanan yang baik. Sebagai contoh, hydroquinone , asam retinoat dan senyawa merkuri organik memiliki efek pemutihan baik, tapi penggunaannya dalam produk kosmetik adalah dilarang di Republik Korea karena masalah keamanan [ 6 ] . Singkatnya , perlu untuk melakukan studi keselamatan di skrining awal tahap bersama-sama dengan penelitian khasiat . Studi keselamatan yang diperlukan untuk pengembangan produk kosmetik termasuk toksisitas akut , toksisitas subakut dan kronis , kulit dan iritasi mukosa , kepekaan kulit , karsinogenisitas , reproduksi toksisitas dan studi genotoxicity . Selain itu, mereka dapat diklasifikasikan dalam tes in vitro , in vivo dan studi Patch manusia dalam hal metodologi . Di masa lalu , dalam studi in vivo didasarkan pada hewan tersebut seperti tikus , tikus atau marmut terutama dipekerjakan . Namun, penyebaran gerakan kesejahteraan hewan telah mengakibatkan penurunan dalam jumlah studi hewan . Sebuah undang-undang langkah-demi - langkah larangan yang menyatakan studi hewan yang menggunakan bahan baku untuk produk kosmetik diberlakukan di Eropa [ 7 ] . Akibatnya , alternatif dalam metode in vitro secara aktif sedang dikembangkan . Dalam ulasan ini , berbagai metode dan mekanisme untuk menunjukkan efikasi agen depigmenting dibahas dan paling efisien dan metode standar yang dapat digunakan untuk menyaring depigmenting agen diselidiki . Untuk tujuan ini , berbagai metode yang dapat digunakan untuk mengevaluasi efikasi dan keamanan serta Mekanisme kerja dari agen depigmenting sehubungan dengan formasi , gerakan dan degradasi melanin yang diidentifikasi dari literatur yang diterbitkan .

Evaluasi Efikasi Agen Depigmenting

Metode untuk evaluasi efikasi agen depigmenting termasuk tes in vitro , in vivo dan uji klinis . In vitro tes fokus pada seleksi agen depigmenting melalui investigasi mekanisme untuk aktivasi atau inhibisi faktor sinyal transfer atau enzim yang terlibat dalam pembentukan melanin . Sebuah laporan adalah baru-baru ini diterbitkan pada metode evaluasi yang mempekerjakan mekanisme menghambat transfer melanosomes yang dibentuk oleh melanosit ke keratinosit [ 8 , 9 ] . Untuk studi klinis , ultraviolet ( UV ) sinar radiasi untuk menginduksi pigmentasi . Dan pengukuran dari efek pemutihan dilakukan untuk ini berpigmen daerah . Agen depigmenting diterapkan untuk individu dengan berpigmen lesi , dan kemudian , pengukuran efek pemutihan
dilakukan. Dalam uji in vitro agen depigmenting Metode in vitro pengujian yang digunakan untuk evaluasi depigmenting agen dapat dibagi menjadi orang-orang bertindak sebelum, selama dan sesudah biosintesis melanin ( Tabel I) [ 4 , 10 ] . Karena dalam metode uji in vitro yang bertindak sebelum biosintesis melanin , efek dari agen depigmenting dapat dievaluasi sesuai dengan ekspresi atau aktivitas faktormenekan MITF , ERK atau biosintesis melanin sinyal transfer lainnya faktor [ 11-13 ] . Karena dalam metode uji in vitro yang bertindak selama melanin biosintesis , mekanisme menghambat enzim yang langsung terlibat dalam biosintesis seperti tirosinase , TRP - 1 , TRP – 2 dan dopachrometautomerase atau kegiatan eliminasi ROS dapat dievaluasi . Melanins dihasilkan oleh melanosit diangkut dari melanosomes ke keratinosit dan kemudian menyebabkan epidermis pigmentasi . Oleh karena itu, salah satu laporan menggambarkan pemutaran depigmenting agen dengan mengevaluasi penghambatan melanosom Gerakan [ 8 ] .

Selain itu, untuk evaluasi in vitro agen depigmenting , sebuah metode untuk mengukur jumlah melanin yang terbentuk melalui sel budaya digunakan secara luas . Metode ini memiliki keuntungan menganalisis efek keseluruhan pada sistem produksi melanin intraseluler , terlepas dari mekanisme aksi , sehingga banyak digunakan segera sebelum in vivo .

Peraturan transfer sinyal seluler

Prinsip . Selain evaluasi efek pemutihan melalui penghambatan langsung tirosinase , penelitian untuk mengevaluasi depigmenting agen melalui peraturan transfer sinyal seluler faktor yang terlibat dalam produksi melanin telah dicoba . sekarang diketahui bahwa biosintesis melanin dimulai ketika sinyal yang disebabkan oleh Sinar UV atau hormon , seperti - MSH , yang ditransfer ke seluler faktor untuk mendorong ekspresi tirosinase .

Merangsang faktor-faktor seperti - MSH dan forskolin , yang menginduksi melanin bertindak produksi untuk meningkatkan konsentrasi intraseluler cAMP , mengaktifkan PKA dan memfosforilasi CREB untuk mengikat dengan CRE , yang menyebabkan peningkatan ekspresi MITF , transkripsi faktor . MITF mengatur ekspresi tirosinase , enzim yang menentukan tingkat biosintesis melanin . Peningkatan ekspresi tirosinase kemudian mendorong produksi melanin . Oleh karena itu , evaluasi ekspresi MITF akan memungkinkan skrining efisien depigmenting agen .

Diketahui bahwa MITF merupakan faktor transkripsi yang mengatur proliferasi, kelangsungan hidup dan pigmentasi melanosit [ 14 , 15 ] .
Pengukuran jumlah MITF menyatakan : The ditangguhkan sel dikenakan penentuan protein , setelah itu , 10 lg dari protein per sampel dipisahkan dengan SDS - oliakrilamida gel elektroforesis .

Protein dipisahkan yang teradsorpsi ke nitroselulosa membran PVDF atau lembaran, dan susu kering digunakan untuk pemblokiran membran pada suhu kamar selama 1 jam. Antibodi spesifik MITF sebagai antibodi primer ditambahkan dan diinkubasi pada suhu di bawah 4 ° C selama 16 jam dengan gemetar . Setelah dicuci, sekunder antibodi dengan enzim terikat ditambahkan untuk menginduksi mengikat dan diinkubasi selama 2 jam . Film ini kemudian terkena pendaran dihasilkan oleh reaksi enzim , dan densitometer yang digunakan untuk uji protein target . Antibodi aktin diperlakukan sesuai dengan prosedur tersebut. Aktin nilai assay digunakan untuk mengoreksi jumlah.

Top of Form

Statistik : Kelompok kontrol dan kelompok - MSH yang diobati digunakan sebagai
kontrol positif . Tingkat penurunan dalam - MSH –induced MITF berekspresi dengan sampel diukur . Prosedur ini diulangi lebih dari tiga kali . Ketika analisis statistik menunjukkan hasil penurunan yang signifikan , sampel dianggap memiliki depigmenting efek .

Tirosinase uji inhibisi

Prinsip . Tirosinase adalah enzim yang terlibat dalam sebagian besar Tingkat penentu penting langkah dalam biosintesis melanin . melanogenesis diprakarsai oleh tirosin yang dimetabolisme menjadi DOPA dan maka dopaquinone oleh tirosinase . Reaksi pertama adalah ratedetermining langkah melanogenesis .

Tirosinase memiliki berbagai bentuk , termasuk mettyrosinase , oxytyrosinase dan deoxytyrosinase . Oxytyrosinase merupakan bentuk aktif , sedangkan deoxytyrosinase merupakan bentuk tidak aktif [ 18 , 22 , 23 ] .

Fungsi tirosinase berkaitan erat dengan penyakit . dalam hewan penelitian , gangguan dalam biosintesis melanin telah ditemukan untuk menyebabkan kondisi warna melanin abnormal seperti vitiligo atau hiperpigmentasi .

Dalam kasus yang parah , kanker kulit dapat mengakibatkan dari seperti gangguan [22]. Oleh karena itu , studi tentang inhibitor tirosinase sangat penting untuk pengembangan obat baru untuk pengobatan pewarnaan melanin normal serta kosmetik fungsional
dimaksudkan untuk menghasilkan efek depigmenting .

Metode yang digunakan untuk menilai tingkat penghambatan tirosinase secara luas digunakan dalam skrining agen depigmenting . Seperti itu mudah digunakan dan dapat diterapkan untuk mengevaluasi banyak sampel di saat yang sama , hal ini dianggap sebagai metode yang paling tepat untuk skrining awal zat kandidat . Metode ini , yang merupakan berdasarkan reaksi enzim - substrat , adalah untuk mendorong reaksi tirosin dan tirosinase untuk jangka waktu tertentu dan untuk mengukur jumlah produk setelah reaksi .
Metode . Jamur tirosinase [ 23 ] , melanoma tirosinase [ 24 ] atau melanosit manusia tirosinase [ 25 ] dapat digunakan . Secara umum, jamur tirosinase banyak digunakan karena mudah untuk mendapatkan . Dopa dapat menjadi produk akhir untuk pengukuran , tetapi tidak banyak dipekerjakan karena kebutuhan untuk penggunaan isotop radioaktif .
HPLC [ 26 ] , metode lain yang dapat digunakan untuk mengukur Dopa, adalah tidak sering digunakan karena memerlukan waktu yang lama untuk menganalisa sampel banyak . Metode yang paling tepat digunakan untuk mengukur dopachrome , salah satu produk reaksi, adalah untuk melakukan spektrometri pada 475 nm [ 27 ] atau 490 nm [28].
Secara umum, metode uji uji inhibisi tirosinase dilakukan sebagai berikut [ 29 ]. Sampel dilarutkan dalam etanol atau lainnya sesuai pelarut dan diencerkan dengan konsentrasi yang tepat range untuk penghambatan tirosinase . Ini pengenceran digunakan sebagai larutan uji ( setidaknya lima konsentrasi ) . Kemudian , 220 lL 0,1 M
dapar fosfat ( pH 6,5 ) , 20 lL larutan uji dan 20 lL dari jamur tirosinase (1500-2000 U mL

a : absorbansi larutan kosong setelah reaksi .
b: absorbansi larutan uji setelah reaksi .
a 'dan b ' : absorbansi ketika diuji dengan penambahan buffer bukannya tirosinase .

Dopa auto - oksidasi uji inhibisi

Uji ini digunakan untuk mengukur oksidasi DOPA dihambat oleh tirosinase . Metode ini mirip dengan tirosinase tersebut uji inhibisi , kecuali ia termasuk penggunaan dopa sebagai substrat.

Penjelasan metode ini berikut [ 30 ] . Sampel dilarutkan dalam etanol atau pelarut yang sesuai , yang diencerkan dengan penyangga yang tepat , seperti 0,1 M buffer fosfat ( pH 7,0 ) , untuk mencapai kisaran yang tepat untuk konsentrasi penghambatan Dopa oksidasi . Ini pengenceran digunakan sebagai larutan uji ( setidaknya lima konsentrasi ) . Kemudian , 850 lL 0,1 M buffer fosfat ( pH 7,0 ) , 50 lL larutan uji dan 50 lL jamur tirosinase(1500-2000 U mL) ( atau tirosinase manusia) yang ditambahkan ke dalam tes
tabung dalam urutan ini , dan reaksi dilakukan pada suhu 37 ° C selama 6 min . Lima puluh microlitres 0,06 mM L - dopa ( L - 3 ,4 - dihydroxyphenylalanine ) larutan ditambahkan pada larutan ini , dan reaksi dilakukan pada suhu 37 ° C selama 1 menit . Absorbansi tersebut kemudian diukur pada 475 nm dengan pembaca lempeng . Untuk solusi kosong , 0,1 M dapar fosfat ( pH 7,0 ) ditambahkan , bukan larutan uji . itu
konsentrasi larutan uji menunjukkan aktivitas penghambatan 50 % ( IC50 ) kemudian dihitung menggunakan program yang tepat . tergantung pada kondisi , tes ini dapat ditingkatkan atau bawah yang diperlukan. Arbutin atau etil ascorbyl eter dapat digunakan sebagai kontrol positif . Dopa oksidasi inhibitionð % Þ ¼ 100 ? ðAbsorbance uji solutionÞ = ðAbsorbance dari kosong solutionÞ ? 100

Dopachrometautomerase uji inhibisi

Prinsip . Dalam biosintesis melanin , tirosin diubah menjadi dopaquinone oleh tirosinase . Dengan adanya sistein , dopaquinone menghasilkan cysteinyldopa , yang akhirnya mengarah ke produksi pheomelanin [ 31 ] . Namun, dengan tidak adanya sistein , dopaquinone mengubah ke pembangkit non - enzimatik dopachrome .

Uji anti – oksidasi

Prinsip . Antioksidan dapat memiliki efek depigmenting dengan berinteraksi dengan o - kuinon , sehingga menghindari polimerisasi oksidatif intermediet melanin , atau dengan tembaga di situs aktif . Selain itu , antioksidan , dengan pembilasan ROS dihasilkan di kulit berikut paparan UV , dapat menghambat kemungkinan utusan kedua yang dapat merangsang melanogenesis epidermal baik secara langsung maupun tidak langsung [ 34 , 35 ] .

Evaluasi depigmenting efek menggunakan melanosit

Prinsip . Metode yang digunakan untuk evaluasi depigmenting Efek menggunakan melanosit adalah sistem penyaringan yang mensimulasikan Kondisi yang mirip dengan kondisi intraseluler dibandingkan dengan in vitro tes aktivitas enzim atau anti - oksidasi dan memiliki keuntungan dari mampu menganalisis efek keseluruhan pada biosintesis melanin melanosit . Namun, karena metode ini sangat kompleks dan memakan waktu ,
diyakini bahwa metode ini sesuai untuk konfirmasi evaluasi sampel yang awal disaring dengan assay aktivitas enzim .

Evaluasi efek depigmenting menggunakan melanosit dapat dilakukan dengan mengukur aktivitas tirosinase intraseluler atau jumlah melanin intraseluler yang dihasilkan . Berbagai metode yang digunakan tergantung pada jenis lini sel , kondisi budaya dan
metode evaluasi . Tabel berikut merangkum melanosit dan kondisi budaya yang sering digunakan ( Tabel II ) .

Kultur melanosit hanya memungkinkan peneliti untuk mengevaluasi efek pada jumlah produksi melanin dalam melanosit , sedangkan itu tidak mempertimbangkan efek pada sinyal ekstraseluler mentransfer . Oleh karena itu, kokultur melanosit - keratinosit dan berbudaya Metode kulit tiga dimensi telah dikembangkan . Namun , metode tersebut tidak banyak digunakan karena mereka mahal dan membutuhkan kondisi yang sulit untuk dicapai.

Melanosom transfer Penghambatan Uji

Prinsip . Melanins disintesis dalam melanosomes melanosit pindah ke ujung dendritik melanosit . Kemudian , dendritik berakhir mengandung melanosomes ditransfer ke keratinosit , dan keratin yang jatuh dan menghilang .
Meskipun transfer melanosomes sangat dipengaruhi oleh hormon atau sinar UV , faktor yang paling penting adalah satu genetik .

Uji Klinis untuk kulit agen depigmenting

Melasma adalah disfungsi sistem pigmen , mengakibatkan tidak teratur coklat atau cokelat keabu-abuan wajah hiper - melanosis . meskipun dapat terjadi pada kedua jenis kelamin dan semua jenis kulit , itu lebih sering terlihat pada wanita [ 48 ] dan mereka yang berkulit gelap – Fitzpatrick jenis kulit IV sampai dengan VI - terutama mereka yang tinggal di daerah radiasi UV yang intens , seperti Hispanik / Latin , Asia dan Afrika Amerika [ 49-51 ] . Kondisi ini biasanya berkembang secara perlahan dan

Studi klinis dilakukan untuk mengevaluasi efek depigmenting dapat dinilai untuk menyelidiki efek pada penghambatan melanin pigmentasi atau efek pada peningkatan berpigmen kondisi . Subjek manusia berpigmen artifisial oleh Radiasi UV atau memiliki situs hiper - pigmentasi , seperti bintik-bintik , lentigo atau kulit bercak yang dapat diselidiki .

Perubahan warna kulit dapat diukur secara visual oleh para ahli atau instrumental diukur dengan menggunakan peralatan seperti Kromameter . Metode evaluasi visual menggunakan skor sistem untuk menilai tingkat pemutih . Oleh karena itu , penting
untuk mengembangkan - dirancang dengan baik protokol , seperti penilaian obyektif metode dan penggunaan evaluator , untuk mendirikan keandalan hasil . Metode evaluasi berperan memiliki keuntungan dari pengukuran kuantitatif dan obyektif . Namun , hasilnya mungkin tergantung pada ukuran dan kondisi lokasi target dan pengalaman dan keterampilan teknisi . Oleh karena itu, diharapkan menggunakan dua metode secara paralel dan untuk membuat kesimpulan dari hasil kedua metode . Melanosomes pindah ke luar kulit dengan keratinosit dan pada akhirnya sloughed off dengan kulit lainnya . Kapasitas kimia produk peeling ( misalnya asam a - hidroksi ) untuk membubarkan pigmen melanin dan / atau mempercepat pergantian epidermal dapat mengakibatkan kulit keringanan [ 57 , 58 ] . Uji klinis dari tingkat turnover epidermis dapat digunakan untuk evaluasi agen pemutih . Evaluasi kemanjuran pada diinduksi pigmentasi.

Pemilihan subyek . Dewasa pria atau wanita sehat, berusia 18 hingga 60 tahun , biasanya dipilih sebagai subyek untuk klinis pada manusia studi . Pada prinsipnya , mereka dengan Fitzpatrick tipe I- III lebih disukai , tetapi mereka dengan jenis III dan IV juga dapat dimasukkan . pencahayaan UVB harus disimpan ke minimum . Mereka yang kesehatan kondisi status, atau kulit dapat mempengaruhi hasil dan wanita yang
sedang hamil atau menyusui harus dikeluarkan . Selain itu, mereka yang pernah mengalami reaksi negatif terhadap gangguan sinar matahari , kulit atau gejala kulit abnormal seperti eritema dan hitam bintik-bintik , yang dapat mempengaruhi interpretasi hasil , harus dikecualikan .

Jumlah mata pelajaran . Jumlah mata pelajaran harus dipilih lebih dari 20 data yang valid menunjukkan untuk memungkinkan perbandingan statistik . Jika kelompok kontrol yang digunakan, metode double-blind , pada prinsipnya , harus dipekerjakan .
Uji daerah . Bagian belakang atau bagian atas lengan atas , yang jarang terkena sinar UV , biasanya dipilih sebagai situs iradiasi .

Terimbas pigmentasi . Sebuah simulator surya dilengkapi dengan xenon lampu busur memiliki itu sebagai spektrum emisi kontinyu yang mirip sinar matahari dan tidak menunjukkan puncak spesifik atau setara lain sumber cahaya yang digunakan untuk menyinari sinar UV untuk situs yang dipilih . Panjang gelombang di bawah 290 nm harus dihilangkan dengan menggunakan filter yang sesuai . Sumber cahaya harus menjaga intensitas konsisten radiasi selama periode pengujian . Sinar UV 2-3 meds seragam iradiasi , atau setelah iradiasi sinar UV dari 1 MED , yang intensitas dapat disesuaikan tergantung pada tingkat diinduksi pigmentasi .

Contoh aplikasi . Bila tujuannya adalah untuk menyelidiki pencegahan efek , sampel segera diterapkan setelah radiasi UV . Jika tujuannya adalah untuk memperbaiki kondisi pigmentasi diinduksi , sampel diterapkan sekali atau dua kali sehari selama 4-8 minggu dari 2 sampai 3 hari setelah radiasi UV .

Evaluasi depigmenting efek . Situs untuk evaluasi harus tidak mengalami aliran udara , dan suhu konstan dan kelembaban harus dipertahankan . Setelah beristirahat selama minimal 30 menit pada situs , subyek dievaluasi . Tingkat efek depigmenting di situs uji visual diperiksa oleh para ahli untuk membuat skor dan / atau tingkat perubahan warna kulit dapat diukur dengan tepat peralatan, seperti kromameter ( Minolta , Osaka , Jepang ) , DemaSpectrometer ( Cortex Technology , Hadsund , Denmark ) atau Mexameter ( Keberanian - Khazaka Elektronik , Koln , Jerman ) [ 59 ] .

Evaluasi keberhasilan dalam hiper – melanosis

Pemilihan subyek . Mereka yang memiliki pigmentasi , seperti bintik-bintik , lentigo atau kulit bercak , dipilih sebagai subyek . Merujuk pada kriteria dijelaskan dalam 3.1 .
Jumlah mata pelajaran . Jumlah mata pelajaran harus dipilih lebih dari 20 data yang valid menunjukkan untuk memungkinkan perbandingan statistik . Jika kelompok kontrol yang digunakan, metode double-blind , pada prinsipnya , harus dipekerjakan .
Uji daerah . Situs yang menampilkan hiper - pigmentasi , seperti mata rims atau lengan atas , yang dipilih . Jika sebuah peralatan yang digunakan untuk evaluasi, situs iradiasi harus dipilih sementara mempertimbangkan daerah pigmentasi minimum yang dapat diukur dengan peralatan .

Contoh aplikasi . Sampel diterapkan sekali atau dua kali sehari selama 4-8 minggu .
Evaluasi depigmenting efek . Lihat dengan yang dijelaskan dalam 3.1 [ 60 ] .
Evaluasi kemanjuran pada stratum korneum tingkat turnover oleh dansil klorida uji
Relawan pria atau wanita sehat berusia 18 sampai 60 yang terpilih sebagai subyek untuk studi klinis . Wanita yang sedang hamil atau menyusui dikecualikan . Secara umum, subyek harus berada dalam kesehatan yang baik dan tidak dapat memiliki kelainan kulit atau gejala kulit abnormal seperti eritema dan bintik-bintik hitam, yang dapat mempengaruhi interpretasi hasil . Empat situs di bawah kedua lengan yang dipilih untuk aplikasi sampel . Contoh aplikasi dilakukan secara acak cara ( sisi atas dan bawah dari kedua lengan ) . dansil klorida ( 5 - metil - amino - 1 - naftalena - sulphonyl klorida ) yang dicampur dengan petrolatum untuk membuat campuran 5 % . Sebelum sampel aplikasi , 5 % dansil klorida diterapkan ke situs tertentu selama 15 jam dengan menggunakan ditutup Patch . Situs yang dipilih akan sangat digosok dengan menggunakan jari mantel . Sebuah irradiator neon digunakan untuk mengukur tingkat neon pigmentasi . Setelah aplikasi 21 - hari sampel, derajat hilangnya pigmen fluorescent diukur [ 58 ] .

Evaluasi keselamatan agen depigmenting

Salah satu hal penting untuk dipertimbangkan dalam pengembangan depigmenting agen adalah keamanan . Untuk produk obat , karena mereka dimaksudkan untuk mengobati penyakit , mereka dapat berguna jika manfaatnya atau khasiat lebih besar daripada efek sampingnya . Namun, di bidang kosmetik, semua produk yang digunakan untuk tujuan kecantikan. Oleh karena itu , produk yang aman tidak didirikan tidak dapat digunakan , bahkan jika mereka memiliki khasiat yang sangat baik . Oleh karena itu , masalah keamanan harus ditangani dari tahap yang sangat awal dalam pengembangan baru kosmetik zat .

Meskipun negara-negara yang berbeda memiliki cakupan yang berbeda keselamatan
Evaluasi berlaku untuk kosmetik tergantung pada sifat substansi , studi berikut harus dilakukan : toksisitas akut tes, iritasi kulit dan sensitisasi , uji iritasi mata ,
phototoxicity dan uji kepekaan dan tes patch manusia. Di Selain itu , pengujian toksisitas dosis berulang , toksisitas reproduksi , Mutagenisitas / genotoxicity atau tes carcinogenicity mungkin diperlukan , jika perlu .

Ini uji toksisitas dilakukan dengan cara dari studi in vivo atau uji klinis . Oleh karena itu , biaya yang cukup besar dan waktu yang dibutuhkan untuk melakukan studi toksisitas lengkap . Hal ini diinginkan untuk mengadopsi strategi desain yang baik dari tahap penyaringan untuk mengidentifikasi yang studi toksisitas harus dilakukan untuk menjamin efisien dan evaluasi yang efektif agen depigmenting . Untuk memilih yang paling tepat dan studi toksisitas yang relevan , penting untuk memahami
kodrat dan sifat zat . untuk umum bahan kimia , toksisitas diharapkan dapat ditentukan dari berbagai laporan yang diterbitkan pada toksisitas serupa lainnya zat . Sebagai banyak data toksisitas dapat dikecualikan bagi alam zat-zat yang dianggap aman karena mereka telah digunakan secara tradisional , skrining agen depigmenting yang akan digunakan dalam pembuatan produk kosmetik aktif .

Pengakuan
Penelitian ini sebagian didukung untuk menerbitkan Kangwon National
Universitas ( 2011) dan Institut Ilmu Farmasi , Kangwon Universitas Nasional .